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蛋白樣品濃度的測定方法之BCA蛋白質定量試劑法

[導讀]確定蛋白樣品濃度對許多實驗都是至關重要的。通常大多數蛋白樣品的濃度可以通過比色測定法定量。根據一些特殊化學試劑與蛋白質結合發生顏色變化的原理,使用分光光度計或酶標儀檢測特定波長下的吸光值,通過與蛋白標準品進行比較,可以換算出樣品中的蛋白含量。

1) Bradford蛋白質定量試劑(Cat#E161-01)——考馬斯亮藍法

原理:根據Bradford染料結合原理,利用考馬斯亮藍G-250染料可與蛋白質結合(主要結合堿性或芳香族氨基酸殘基),形成藍色復合物的特性,通過測定樣品在595 nm波長下的吸光值,并同BSA標準品所繪制的定量標準曲線做比對,即可計算出待測樣品的蛋白質濃度。該方法可測定分子量在3000以上的多數蛋白和多肽濃度,具有靈敏度高、操作簡便、快速、價格低廉等特點,是目前實驗室最常用的蛋白質粗略定量方法。由于Bradford測定法會受樣品中的一些試劑,特別是去垢劑的干擾,故使用時應先排除干擾因素。

2) BCA蛋白質定量試劑(Cat# E162-01)——BCA方法

原理:BCA(Bicinchoninic Acid)蛋白濃度檢測法是目前常用的蛋白質定量方法之一。BCA測定方法的原理與Lowry法相似,利用Cu2+在堿性條件下,可以被蛋白質還原成Cu+,Cu+與BCA試劑結合形成紫色的絡合物的特性,通過測定樣品在562 nm波長下的吸光值,并同蛋白標準曲線對比,即可計算出待測樣品的蛋白濃度。BCA法與Lowry法相比,操作更為簡便,穩定性更好。該方法還具有反應產物穩定、靈敏度高、線性范圍廣、對不同種類蛋白質檢測的變異系數小、對去垢劑耐受性好等特點,特別適合于微量測定。

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