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化學發光成像系統在wb實驗中如何使用探討!

[導讀]化學發光成像分析系統,適用于各種化學發光標記的樣品如western blot,但同時也可以用于普通凝膠成像。因為普通凝膠是有毒的,所以一般客戶都不會用化學發光成像分析系統的儀器來拍普通凝膠。

化學發光成像系統是否能夠拍攝到ECL的圖像主要取決于設備是不是帶有制冷的CCD,只有制冷的CCD才夠靈敏地捕捉到膜上發出的光。隨著Cooled-CCD技術的發展,成像系統成本越來越低,化學發光成像系統儀器的使用非常簡單:   1)在使用前開機預冷,待儀器溫度降到-20℃才可以進行檢測;   2)將化學發光檢測試劑盒中的A和B按照1:1混合;   3)PVDF膜正面朝上放于暗箱,用移液槍將發光液均勻地涂在膜上,關閉暗箱箱門,進行曝光;   4)曝光可以自動曝光,也可手動曝光,一般先點擊自動曝光,觀察成像效果,若不理想可再手動調節曝光時間;   5)外化學發光成像系統還具有多張拍攝模式,可將一張膜在不同的曝光時間下連拍6張,使曝光更方便。內參一般顯影15s(影像條帶粗細深淺一致說明內參已調齊),內參好說明各步實驗操作均無誤,即可進行后續的目的蛋白檢測,目的蛋白結果的好壞就取決于其表達量以及抗體的特異性和效價了。   6)與X膠片相比,化學發光成像系統具有瞬時影像處理、立即輸出、不需要膠片處理裝置及暗室等成本花費、可用軟件半定量分析等優點,因而在現在的實驗室里化學發光成像系統的使用已經逐漸取代傳統的暗室壓片曝光檢測。

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