裂解組織或細胞的時候，那些裂解液中，某些溶劑本身會使CoomassieG250或者Bradford法（實際也是Coomassie染色）顯色，尤其是去污劑之類；例如NP40，就會使Coomassie顯藍色，可以完全覆蓋掉蛋白與Coomassie作用產生的藍色。因此，如果你的裂解液里面含有這類物質，所謂的蛋白定量實際是NP40顏色和蛋白染色的疊加，根本不會符合標準蛋白曲線的線性規律，自然定不準。你從制備樣品時就注意過定量問題，通常內參差別不會太大。如果真的有差別，通常我們會先跑少量的樣品，目的是讓Actin或tubulin更清晰、不會粘連、不會過曝光。從而在第二輪跑正式結果前，根據第一輪的內參的熒光信號做微調，大致能做到相當；最多可能需要第三輪。以上的試驗可以精確到0.1ul差異