A280nm是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估:純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。假如比值低，表示受到蛋白（芳香族)或分類物質的污染，需要純化樣品。比值=1.5相當于50%蛋白質/DNA溶液。A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估:純DNA和RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑污染，需要純化樣品。
A320nm或A340nm為檢測溶液樣品的濁度，該值應該接近0.0。假如不足，標明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。
A260/A280比值可提供DNA純度的一個參考，但A260/A280比值會受pH影響。如果未調pH，比值可能與實際近期將陸續推出一批全新的分析類儀器。差別很大。如果需要準確數值，建議在10 mM Tris Cl，pH 8.5中檢測，此時純凈的 DNA A260/A280比值應為1.8-2.0（注意應使用同樣緩沖液作為對照)
在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計的測試范圍）。最后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
